7分钟前 细胞实验外包在线咨询「英瀚斯」[英瀚斯2eefa30]内容：Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。细胞长满后，先用D-PBS冲洗，倒掉后加胰酶消化(此步时间不宜过长，作者--般不超过五分钟)，按1:5传代。WST-8【化学名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，是一种类似于MTT的化合物，它在电子载体1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯（1-Methoxy PMS）存在的情况下，被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物（formazan）。细胞增殖越多越快，颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色的深浅与活xi胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。这些污染在细胞培养中的特点及相应的解决办法如下：

1.细菌污染

细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据gan染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。

解决方法：仔细检查器具的灭菌情况，确保通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。2、间接磁性细胞标记(Indirectmagneticcelllabeling)(磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆抗ti和MACS间标微珠。重要的是，与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次，则可能会导致储存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外，建议在培养基中添加抗生su。

Q:中的沉淀物对细胞培养有什么影响？

A:（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它生产商也证明了这一点。

（2）过滤，如果中出现大量的沉淀物，将很难过滤。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。一般说来，因为在生产工序中已经过 100nm 或者 40nm 的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养 的。在实验室中没有必要再过滤处理，在大规模的细胞培养中往往将直接加到培养基中一起 过滤。

（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起。研究者可能会在中观察到一些絮状的 沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状 沉淀，因此就断定被污染了。并且当研究者将样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可 以运动的小黑点，因此就更加确认是被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商 确认，但终确定没有被污染而只是沉淀。结果与结论:培养前4d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞,CD133+细胞占19。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将放在 培养箱中培养观察是否有菌，而是将加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进 行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。