脑组织组化实验
1. 灌注固定用的针头，一般都用注she针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头，小鼠可用 6、7 号针头，但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。
2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不必要插入到升主动脉内。操作的要点是：，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心脏；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，确保穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，若遇阻力要改变方向再试，不要用力蛮插。
3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4% 多聚甲醛用量约相当于老鼠体重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续 1-2 个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于 4% 多聚甲醛内 4 度后固定 4-6 个钟头。
什么是siRNA ？
小干扰 RNA (siRNA) 是由 20-25 个核苷酸组成的双链 RNA 分子，在细胞中具有多种功能。在 RNA 干扰 (RNAi) 通路中，siRNA 通过与互补 mRNA 分子杂交干扰基因表达。这种干扰会触发 mRNA 降解，进而抑制特定基因的基因表达。
siRNA 于 1999 年由 David Baulcomb 实验室shou次发现。2001 年，Thomas Tuschl 提出合成 siRNA 会在哺乳动物细胞中诱导 RNA 干扰 (RNAi)。如今，专门设计用于与 RNA 靶序列杂交并使其降解的“合成”siRNA 寡核苷酸已被广泛用于诱导细胞 RNAi。靶 mRNA 的降解能够有效“敲除”相应蛋白质的表达。然后可研究分析靶蛋白浓度降低造成的影响。
siRNA 的作用原理
利用短寡核苷酸 siRNA 或能够转录 siRNA 的 DNA 质粒将双链 RNA (dsRNA) 引入细胞。细胞中的 Dicer 蛋白将 dsRNA 消化为 21 bp 的 dsRNA (siRNA)。 siRNA 被整合到 RNA 诱导沉默复合体 (RISC) 中。在 RISC 复合体中，dsRNA 发生链分离。其反义链与细胞中的互补/靶 mRNA 杂交。活化 RISC 中的核酸酶降解靶 mRNA。断裂的 mRNA 无法翻译成蛋白质。也就是说蛋白质无法表达，从而成功“敲除”蛋白质。
