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保持手术间的正压 手术中保持电动门处于关闭状态，尽量减少开关次数，严禁开门手术。在新风管道上采用双位控制的定风量装置，当手术室工作时，空调系统开启，排风机开启，新风管上的双控阀实施调节，满足室内正压要求。因为手术室的环境是一个密闭的洁净环境，门关闭时室内的气压大于室外的气压，从而保证手术室内的洁净空气只能向室外流动，室外的空气不会进入室内，开门后就破坏了压差系统，手术间的净化质量也将受到影响。
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工作服应选用不易产生静电、不易脱落纤维的涤纶和尼龙织物。对房间中间的脏污设备进行清洁和消毒，然后移到干净的周边，直到所有物品都经过处理。定期检测层流系统功能状态，测试层流手术室环境空气洁净度指标和细菌培养等。总之，使用层流手术室，强化无菌观念和正规化管理仍然是程安全的根本保证与要求，仍然是手术室工作之根本、之重点，只有当两者紧密结合起来才是趋于的。
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按手术有菌或无菌的程度，手术间可划分成以下5类：(1)Ⅰ类手术间：即无菌净化手术间，主要接受颅脑、心脏、脏器移植等手术。（3）尽量减少层流手术室的开门次数与时间（更不可将门打开不关），维持'相对密闭状态'，以防外来污染的进入。(2)Ⅱ类手术间：即无菌手术间，主要接受脾切除手术、闭合性切开复位术、眼内手术、甲状腺切除术等无菌手术。(3)Ⅲ类手术间：既有菌手术间，接受胃、胆囊、肝、阑尾、、肺等部位的手术。
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手术室须严格划分为限制区(无菌手术间)、半限制区(污染手术间)和非限制区。半限制区包括急诊手术间或污染手术间、器械敷料准备室、准备室、消毒室。三区分隔开的设计有二：一手术室为将限制区与半限制区分设在不同楼层的两部分，这种设计可彻底进行卫生学隔离，但需二套设施，增加工作人员，管理不便；二为在同一楼层的不同段设限制区和非限制区，中间由半限制区过渡，设备共用，这种设计管理较方便。